ຜະລິດຕະພັນ

ທາດໂປຼຕີນຈາກ phosphorylation ຄວບຄຸມການເຮັດວຽກຂອງຈຸລັງທີ່ຫຼາກຫຼາຍແລະມີບົດບາດສໍາຄັນໃນການພັດທະນາຕົ້ນຂອງພືດ.ເພື່ອເສີມແລະຂະຫຍາຍການສືບສວນທີ່ຜ່ານມາຂອງ phosphorylation ທາດໂປຼຕີນໃນເບ້ຍ Arabidopsis, ພວກເຮົາໄດ້ນໍາໃຊ້ວິທີການທາງເລືອກທີ່ປະສົມປະສານການສະກັດເອົາທາດໂປຼຕີນພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ບໍ່ເປັນ denaturing ກັບ immobilized metal-ion affinity chromatography (IMAC) ການເສີມສ້າງ phosphoproteins intact ໃນສານສະກັດຈາກ Rubisco-depleted, ປະຕິບັດຕາມໂດຍການກໍານົດ. ການ​ນໍາ​ໃຊ້ electrophoresis gel ສອງ​ມິ​ຕິ​ລະ​ດັບ (2​-DE​) ແລະ​ຂອງ​ແຫຼວ chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS​)​.ການຍ່ອຍສະຫຼາຍຂອງ trypsin ໃນ gel ແລະການວິເຄາະຈຸດ gel ທີ່ເລືອກໄດ້ກໍານົດ 144 peptides phosphorylated ແລະ residues, ເຊິ່ງມີພຽງແຕ່ 18 phosphopeptides ແລະ 8 phosphosites ໄດ້ຖືກພົບເຫັນຢູ່ໃນ PhosPhAt 4.0 ແລະ P3DB Arabidopsis thaliana phosphorylation site databases.ຫຼາຍກວ່າເຄິ່ງຫນຶ່ງຂອງ 82 phosphoproteins ທີ່ໄດ້ກໍານົດໄດ້ມີສ່ວນຮ່ວມໃນການເຜົາຜະຫລານຄາໂບໄຮເດຣດ, ການສັງເຄາະແສງ / ການຫາຍໃຈຫຼືການຕອບໂຕ້ຄວາມກົດດັນ oxidative sms.ການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ phosphoproteins intact ກ່ອນ 2-DE ແລະ LC-MS / MS ເບິ່ງຄືວ່າຈະເສີມຂະຫຍາຍການກວດພົບຂອງ phosphorylate threonine ແລະ tyrosine residues ເມື່ອທຽບກັບວິທີການທີ່ນໍາໃຊ້ການເສີມລະດັບ peptide, ແນະນໍາວ່າທັງສອງວິທີການແມ່ນປະສົມປະສານບາງຢ່າງໃນການຄຸ້ມຄອງສະຖານທີ່ phosphorylation.ການປຽບທຽບຜົນໄດ້ຮັບສໍາລັບເບ້ຍອ່ອນກັບຜູ້ທີ່ໄດ້ຮັບໃນເມື່ອກ່ອນສໍາລັບໃບ Arabidopsis ແກ່ໄດ້ກໍານົດຫ້າທາດໂປຼຕີນທີ່ມີຄວາມແຕກຕ່າງກັນ phosphorylated ໃນເນື້ອເຍື່ອເຫຼົ່ານີ້, ສະແດງໃຫ້ເຫັນທ່າແຮງຂອງເຕັກນິກນີ້ສໍາລັບການສືບສວນການເຄື່ອນໄຫວຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ phosphorylation ໃນລະຫວ່າງການພັດທະນາພືດ.