ຜະລິດຕະພັນ

ການທົດສອບ chromatography ຂອງແຫຼວທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງໃຫມ່ສໍາລັບ glycosyltransferases ໂດຍອີງໃສ່ການສືບພັນດ້ວຍອາຊິດ anthranilic ແລະການກວດຫາ fluorescence.

ການວິເຄາະໄດ້ຖືກພັດທະນາໂດຍໃຊ້ເຄມີການຕິດສະຫລາກທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງອາຊິດ 2-aminobenzoic (2AA; ອາຊິດ anthranilic, AA) ສໍາລັບການວັດແທກກິດຈະກໍາຂອງທັງສອງ β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) ແລະ α2-6 sialyltransferase (ST-6) ໂດຍຂອງແຫຼວທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງ. chromatography (HPLC) ກັບການກວດຫາ fluorescence (Anumula KR. 2006. ຄວາມກ້າວຫນ້າຂອງວິທີການ fluorescence derivatization ສໍາລັບການວິເຄາະ chromatographic ແຫຼວປະສິດທິພາບສູງຂອງທາດແປ້ງ glycoprotein. Anal Biochem. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) ແລະ N-acetyllactosamine ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຜູ້ຮັບແລະ uridine diphosphate (UDP)-galactose ແລະ cytidine monophosphate (CMP)-N-acetylneuraminic acid (NANA) ເປັນຜູ້ໃຫ້ທຶນສໍາລັບ GalT-1 ແລະ ST-6, ຕາມລໍາດັບ.ຜະລິດຕະພັນ Enzymatic ໄດ້ຖືກຕິດສະຫຼາກຢູ່ໃນສະຖານທີ່ທີ່ມີ AA ແລະຖືກແຍກອອກຈາກຊັ້ນຍ່ອຍໃນຖັນ TSKgel Amide 80 ໂດຍໃຊ້ເງື່ອນໄຂໄລຍະປົກກະຕິ.ຫົວໜ່ວຍຂອງເອນໄຊໄດ້ຖືກກໍານົດຈາກພື້ນທີ່ສູງສຸດໂດຍການປຽບທຽບກັບມາດຕະຖານທີ່ເກີດມາພ້ອມໆກັນ Gal-β1-4GlcNAc ແລະ NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Linearity (ເວລາແລະຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ enzyme), ຄວາມແມ່ນຍໍາ (ພາຍໃນແລະ interassay) ແລະການສືບພັນສໍາລັບການວິເຄາະໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ.ການວິເຄາະໄດ້ຖືກພົບເຫັນວ່າເປັນປະໂຫຍດໃນການຕິດຕາມກິດຈະກໍາຂອງ enzyme ໃນລະຫວ່າງການໂດດດ່ຽວແລະການເຮັດຄວາມສະອາດ.ການວິເຄາະແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງແລະປະຕິບັດເທົ່າກັບຫຼືດີກວ່າການວັດແທກນໍ້າຕານ radioactive ພື້ນເມືອງ.ຮູບແບບການວິເຄາະຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການວັດແທກກິດຈະກໍາຂອງຕົວໂອນອື່ນໆ, ສະຫນອງໃຫ້ວ່າຕົວຮັບຄາໂບໄຮເດຣດມີສ່ວນຫຼຸດສໍາລັບການຕິດສະຫຼາກ.ການວິເຄາະສໍາລັບຜູ້ຍອມຮັບ glycoprotein ໄດ້ຖືກພັດທະນາໂດຍໃຊ້ IgG.ວິທີການຫຍໍ້ HPLC ໄດ້ຖືກພັດທະນາສໍາລັບການແຍກຕົວຂອງ IgG glycans (biantennary G0, G1, G2, mono- ແລະ disialylated), ເຊິ່ງອໍານວຍຄວາມສະດວກໃນການກໍານົດກິດຈະກໍາ GalT-1 ແລະ ST-6 ຢ່າງໄວວາ.ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ວິທີການ profileing ນີ້ຄວນຈະເປັນປະໂຫຍດສໍາລັບການຕິດຕາມກວດກາການປ່ຽນແປງຂອງ IgG glycans ໃນການຕັ້ງຄ່າທາງດ້ານການຊ່ວຍ.