ຜະລິດຕະພັນ

ເກືອ Tris acetate ຖືກນໍາໃຊ້ເລື້ອຍໆໃນການກະກຽມຂອງ TAE (Tris-acetate-EDTA) buffer, ເຊິ່ງຖືກນໍາໃຊ້ເປັນ buffer ແລ່ນແລະໃນ agarose gels.Tris Acetate-EDTA buffer ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບ DNA agarose gel electrophoresis ແຕ່ຍັງຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການ electrophoresis RNA agarose gel ທີ່ບໍ່ແມ່ນ denaturing.DNA ແບບ double-stranded ມີແນວໂນ້ມທີ່ຈະແລ່ນໄວໃນ TAE ກ່ວາໃນ buffers ອື່ນໆແລະອາດຈະຫມົດໄປໃນລະຫວ່າງການຂະຫຍາຍ electrophoresis.ການໄຫຼວຽນຂອງ Buffer ຫຼືການທົດແທນ buffer ໃນລະຫວ່າງການຂະຫຍາຍ electrophoresis ສາມາດແກ້ໄຂຄວາມອາດສາມາດ buffering ຕ່ໍາ.ອາດຈະຖືກນໍາໃຊ້ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່າງໆເພື່ອສຶກສາການເຄື່ອນໄຫວຂອງ DNA ໃນການແກ້ໄຂ.ເນື່ອງຈາກ borate ໃນ TBE buffer (Tris-Borate-EDTA Buffer, 10X Powder Pack, sc-296651) ເປັນຕົວຍັບຍັ້ງທີ່ເຂັ້ມແຂງສໍາລັບ enzymes ຫຼາຍ, TAE buffer ແມ່ນແນະນໍາໃນເວລາທີ່ເບິ່ງຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ enzymatic ສໍາລັບຕົວຢ່າງ DNA.ເກືອ Tris acetate ຍັງເປັນ buffer ທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງໃນການວິເຄາະ ATP ກັບ firefly luciferase.

ການນໍາໃຊ້: TAE ແລ່ນ buffer ເປັນ buffer ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປທີ່ສຸດສໍາລັບ DNA agarose gel electrophoresis, ແລະຍັງຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບ RNA agarose gel electrophoresis ພື້ນເມືອງ.DNA ເສັ້ນຄູ່ມີແນວໂນ້ມທີ່ຈະເຄື່ອນຍ້າຍໄວໃນ TAE ກ່ວາໃນ buffers ອື່ນໆ, ແຕ່ຍັງບໍ່ສາມາດລອຍຍ້ອນການ depletion ຂອງ buffer ions ໃນລະຫວ່າງການ electrophoresis ຍາວ.Buffer cycling ຫຼື buffer exchange ໃນລະຫວ່າງການ electrophoresis ດົນນານສາມາດຊົດເຊີຍຄວາມສາມາດຂອງ buffer ຕ່ໍາ.2 ເຈືອຈາງ Buffer TAE ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນເພື່ອໃຫ້ໄດ້ 1 mMTAE buffer ທີ່ມີ 40 mM Tris acetate ແລະ 1 mM EDTA, pH 8.3.1 mMTAE buffer ສາມາດນໍາໃຊ້ໄດ້ທັງໃນ agarose gels ແລະເປັນ buffer ແລ່ນ.ສໍາລັບຄວາມລະອຽດສູງສຸດ, ມັນແນະນໍາໃຫ້ແຮງດັນໄຟຟ້າຕ່ໍາກວ່າ 5V / cm (ໄລຍະຫ່າງລະຫວ່າງ electrodes ຫນ່ວຍ).

ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ: TAE ແລ່ນ buffer ເປັນ buffer ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປທີ່ສຸດສໍາລັບ DNA agarose gel electrophoresis ໃນ Chemicalbook gel, ແລະມັນຍັງຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການທີ່ບໍ່ແມ່ນ denaturing RNA agarose gel electrophoresis.DNA ເສັ້ນຄູ່ມີແນວໂນ້ມທີ່ຈະເຄື່ອນຍ້າຍໄວໃນ TAE ກ່ວາໃນ buffers ອື່ນໆ, ແຕ່ຍັງບໍ່ສາມາດລອຍຍ້ອນການ depletion ຂອງ buffer ions ໃນລະຫວ່າງການ electrophoresis ຍາວ.Buffer cycling ຫຼື buffer exchange ໃນລະຫວ່າງການ electrophoresis ດົນນານສາມາດຊົດເຊີຍຄວາມສາມາດຂອງ buffer ຕ່ໍາ.ບັຟເຟີ TAE ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໄດ້ຖືກເຈືອຈາງເພື່ອໃຫ້ໄດ້ 1 mMTAE buffer ທີ່ມີ 40 mM Tris acetate ແລະ 1 mM EDTA, pH 8.3.1 mMTAE buffer ສາມາດນໍາໃຊ້ໄດ້ທັງໃນ agarose gels ແລະເປັນ buffer ແລ່ນ.ສໍາລັບຄວາມລະອຽດສູງສຸດ, ມັນແນະນໍາໃຫ້ແຮງດັນໄຟຟ້າຕ່ໍາກວ່າ 5V / cm (ໄລຍະຫ່າງລະຫວ່າງ electrodes ຫນ່ວຍ).

ການນໍາໃຊ້: ໃນການກວດພົບ ATP ກັບ firefly luciferase, ຜະລິດຕະພັນນີ້ແມ່ນ buffer ທີ່ລະອຽດອ່ອນທີ່ສຸດ;ການກວດພົບການຜູກມັດ glutamate.

ການຜູກມັດທີ່ຖອດອອກໄດ້ຂອງ [3H]l-glutamic acid ກັບວັດສະດຸທີ່ບໍ່ແມ່ນຕົວຮັບ.

[3H]ອາຊິດ L-glutamic binding ກັບທໍ່ microfuge ແລະແກ້ວໄດ້ຖືກສືບສວນຢູ່ໃນສີ່ buffers.ການຜູກມັດພື້ນຖານກັບວັດສະດຸເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນມີຫນ້ອຍ, ແຕ່ໄດ້ຖືກເພີ່ມຂຶ້ນໂດຍການບີບອັດຫຼືການດູດຊຶມໃນ Tris-HCl ແລະ Tris-citrate buffer.ການຜູກມັດນີ້ແມ່ນຫນ້ອຍລົງຫຼາຍຫຼືເມື່ອ HEPES-KOH, ຫຼື Tris-acetate buffer ຖືກນໍາໃຊ້ແທນ.[3H]ການຜູກມັດ L-glutamate ກັບທໍ່ microfuge ຖືກຍັບຍັ້ງໂດຍ L- ແຕ່ບໍ່ແມ່ນ D-isomers ຂອງ glutamate ແລະ aspartate.ອາຊິດ DL-2-amino-7-phosphonoheptanoic ບໍ່ໄດ້ຍັບຍັ້ງການຜູກມັດ.ທາດປະສົມອື່ນໆທີ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຍັບຍັ້ງຕ່ໍາຫາປານກາງແມ່ນ: N-methyl-D-aspartate, quisqualate, L-glutamic acid diethyl ester, N-methyl-L-aspartate, kainate, ແລະ 2-amino-4 -phosphonobutyrate.ການຜູກມັດໄດ້ຖືກຍັບຍັ້ງໂດຍເຍື່ອສະຫມອງຂອງຫນູທີ່ມີລັກສະນະພິເສດ.ການຜູກມັດ glutamate ທີ່ຂຶ້ນກັບທາດໂປຼຕີນແມ່ນໄດ້ຮັບດ້ວຍການກຽມເຍື່ອທີ່ແຊ່ແຂງຊ້ຳແລ້ວຊ້ຳອີກ ເມື່ອການຜູກມັດໄດ້ຖືກເຮັດໃນ buffer Tris-acetate.ແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ Tris-acetate ຫຼື HEPES-KOH buffer ໃນການທົດສອບ glutamate bin ding.ຖ້າ Tris-HCl ຫຼື Tris-citrate buffer ຖືກນໍາໃຊ້, ການທົດລອງການຄວບຄຸມທີ່ເຫມາະສົມຄວນຈະຖືກເຮັດເພື່ອແກ້ໄຂການຜູກມັດກັບທໍ່ microfuge ຫຼືການກັ່ນຕອງເສັ້ນໄຍແກ້ວ.